基因ZL可以在DNA和mRNA水平上對致病基因進行修正從而達到治LX果，相對于傳統藥物，對于一些成藥性較差的靶點具有獨特優勢，因此基因ZL對于特定基因引起的疾病有極大的應用潛能，其中腫瘤和罕見病是基因ZLZ主要的應用領域。在ZG，基因ZL藥物Gendicine于2004年獲得國家食品藥品監督管理局的批準上市，成為世界上shou個獲批上市的商業基因ZL產品。2005年，溶瘤病毒產品Oncorine也在ZG獲批上市，目前，已有300余個基因ZL產品已經上市或正在FDA和EMA的監管下進行開發，這些基因ZL產品都涉及持續的編碼蛋白質DNA轉移，并利用了多種體內和體外技術。

使用毛細管電泳SCIEX PA 800 Plus藥物分析系統，可廣泛應用于基因ZL中的質粒DNA純度分析、腺相關病毒（AAV）衣殼蛋白的純度分析、腺相關病毒的等電點分析、宿主細胞殘留DNA的片段分布分析等許多方向，并具備以下優勢特點：

· 分離度好：可基線分離超螺旋、開環及線性的質粒，可基線分離AAV的VP1、VP2、VP3蛋白，易于產品的定量及質控；

· 重復性好：超螺旋質粒：遷移時間相對標準偏差（RSD）＜0.5%，校準峰面積RSD＜2%；AAV衣殼蛋白：遷移時間RSD＜0.5%，校準峰面積RSD＜5%；AAV等電點：pI的RSD＜0.2%， 峰面積RSD＜2%。

· 靈敏度高：使用激光誘導熒光的檢測模式等，可提供超高的檢測靈敏度；

· 操作簡單：具有商品化的試劑盒，自動化程度高；

· 適用范圍廣、方法靈活度高：適用于不同大小范圍的質粒的分析；針對不同血清型AAV，可優化方法得到更優異的純度和等電點分析結果；

· 符合法規：儀器具有操作（OQ）認證，操作軟件能夠進行權限設置和審計

圖1. SCIEX PA 800 Plus藥物分析系統與試劑盒

01-毛細管凝膠電泳法（CGE-LIF）對質粒DNA的純度分析

質粒DNA作為基因制劑的傳遞載體，被廣泛應用于基因ZL、細胞ZL、疫苗等生物制品領域。質粒DNA主要有三種拓撲結構，超螺旋、開環和線性形式。超螺旋質粒在細胞轉染及基因表達方面優于其他形式，所以，高質量、高純度的超螺旋質粒DNA是確保基因制劑安全性和有效性的前提條件。歐洲藥物評審組織（EMEA）在關于“慢病毒載體的生產與開發”指導方針中指出，有必要在慢病毒載體的生產中使用高質量的質粒DNA。美國食品藥品監督管理局（FDA）用于基因制劑質粒DNA指導意見的要求，超螺旋質粒百分比需大于80%。我國《生物技術藥物研究開發和質量控制》一書中指出，對于質粒類生物制品超螺旋比例一般要大于90%。在質粒的研發和生產過程中，質粒的純化工藝研究，制劑配方工藝研究，大規模生產的批次一致性，都需要對質粒的超螺旋結構進行質控檢測。使用SCIEX PA 800 Plus藥物分析系統，結合激光誘導熒光檢測器（LIF）和dsDNA 1000 試劑盒（貨號477410），可以對質粒的三種拓撲結構進行GX分離，并能準確計算超螺旋百分比，用于質粒的純度檢測（圖2）。

圖2  CGE-LIF方法分析質粒的純度

02-CE-SDS-LIF方法測定腺相關病毒衣殼蛋白的純度

腺相關病毒（AAV）是常用于細胞/基因ZL的載體，由衣殼蛋白及包裝的核酸組成。AAV具有表達時間長、特異性強、安全性高、免疫原性低等優勢，是細胞/基因ZL中重要的組成部分。AAV衣殼主要分為VP1、VP2和VP3三種蛋白構成，三種衣殼蛋白的純度分析是AAV產品質量和安全的重要檢測項目；而AAV產品具有多種血清型，且普遍濃度較低，需開發一種針對不同血清型均具有較高分離度和靈敏度的分析方法。SCIEX PA 800 Plus藥物分析系統連接激光誘導熒光檢測器（LIF）（圖1）并使用SDS-MW分子量測定試劑盒是分析AAV衣殼蛋白純度的有效方法，檢測結果如圖3。

圖3. CE-SDS-LIF方法分析AAV衣殼蛋白的純度

03-毛細管凝膠電泳法（CGE-LIF）分析宿主細胞殘留DNA的片段分布

生物制品中的疫苗、重組蛋白藥、抗體藥等產品多采用連續傳代的動物細胞株表達生產。雖然經過嚴格的純化工藝，但產品中仍有可能殘余宿主細胞的DNA片段。這些宿主細胞殘留DNA（HCD）可能帶來傳染性或致瘤性風險。現有研究表明，一個功能基因至少在200 bp以上，因此殘留DNA片段越大，風險等級越高。美國食品藥品監督管理局（FDA）關于人類基因ZL新產品生產指導文件中明確指出HCD的片段要小于200 bp；國家藥品監督總局（NMPA）生物制品藥學部同樣在基因ZL產品藥學研究與評價技術指導原則的征求意見稿中指出，HCD的片段要小于200 bp。因此基因ZL終產品中需要合適的方法檢測HCD的片段大小分布情況。使用SCIEX PA 800 Plus藥物分析系統，結合激光誘導熒光檢測器（LIF）和dsDNA 1000 試劑盒（貨號477410），可對HCD進行片段分布檢測（圖4）。

圖4 CGE-LIF方法分析DNA片段標準品的大小

04-cIEF方法測定腺相關病毒的等電點

腺相關病毒（AAV）是由結構蛋白與內部核酸物質組成復制缺陷性病毒，由于其具有表達時間長、特異性強、安全性高、免疫原性低等優勢，被廣泛認為是介導基因ZL的理想載體之一。病毒顆粒的衣殼表面暴露的氨基酸側鏈決定了AAV具有特定的等電點（Isoelectric Point，pI），內部核酸的填充情況會造成AAV等電點的差異。AAV是通過重組表達生產，不同的血清型及病毒構建的不完整性均可影響產品的等電點，因此等電點的特性可用于鑒別和監控AAV的種類和產品質量。SCIEX PA 800 Plus藥物分析系統與cIEF等電點測定試劑盒可以直接分析完整病毒顆粒，不存在污染毛細管或堵塞毛細管的情況，是測定AAV等電點的有效方法，檢測結果如圖5。

圖5. cIEF方法分析AAV的等電點

綜上所述，SCIEX PA 800 Plus藥物分析系統可廣泛應用于基因ZL中的質粒DNA純度分析、腺相關病毒衣殼蛋白的純度分析、腺相關病毒的等電點分析、宿主細胞殘留DNA的片段分布分析等許多方向，在同一平臺上實現多重表征與應用，全面支持監管合規，為您的生物制品成功保駕護航。