毛細管電泳引物探針質(zhì)控第二彈

來源：杭州厚澤生物科技有限公司      分類：工作原理 2020-12-23 17:24:21 3277閱讀次數(shù)

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引物是分子生物學(xué)實驗中必不可少的部分，它通常是人工合成的兩段寡核苷酸序列，一個引物與靶區(qū)域一端的一條DNA模板鏈互補，另一個引物與靶區(qū)域另一端的另一條DNA模板鏈互補，其功能是作為核苷酸聚合作用的起始點，核酸聚合酶可由其3’端開始合成新的核酸鏈。常用的人工合成寡核苷酸探針與引物類似，是一段帶有檢測標(biāo)記，且順序是已知的，與目的基因互補的核酸。

分子生物學(xué)實驗中經(jīng)常會因為引物或者探針的問題導(dǎo)致產(chǎn)物擴增不出或者引物二聚體含量很高無法確定產(chǎn)物質(zhì)量，即使換不同的酶調(diào)整退火溫度都沒有效果，所以擴增前的質(zhì)控很有必要。前面我們已經(jīng)提到過（毛細管電泳技術(shù)在引物質(zhì)控方向的應(yīng)用）實驗室一般采用PAGE方法進行質(zhì)控，但是整個質(zhì)檢過程比較繁瑣復(fù)雜，耗時較長，且無法對主帶和雜帶進行定量分析，更多靠經(jīng)驗判斷樣本合格與否；有些單位也會采用毛細管電泳-質(zhì)譜聯(lián)用（CE-MS）技術(shù)來質(zhì)檢Oligo引物，不過質(zhì)譜儀價位較高，用于引物質(zhì)控會提高引物合成的成本。Qsep系列全自動毛細管電泳儀有著高分辨率、高靈敏度和通量靈活等特點，在引物和探針質(zhì)控中有著得天獨厚的優(yōu)勢，是進行引物質(zhì)控的不二選擇。

前面的文章中我們已經(jīng)展示過Qsep系列引物質(zhì)控的一些相關(guān)結(jié)果，而ZX的小片段ladder為引物和探針質(zhì)控添磚加瓦（圖1），可通過峰圖上的片段大小及峰的占比，更加直觀的看出結(jié)果的質(zhì)量情況（圖2,3,4）。

圖1 120nt ladder

圖2 質(zhì)量較好引物質(zhì)控結(jié)果

圖3 質(zhì)量較差引物質(zhì)控結(jié)果

圖4 探針質(zhì)控結(jié)果

標(biāo)簽：毛細管電泳

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