采用實時熒光PCR技術，針對李斯特菌屬特異性基因設計引物和探針。PCR擴增過程中，與模板結合的探針被Taq酶分解產生熒光信號，熒光定量PCR儀根據檢測到的熒光信號繪制出實時擴增曲線，從而實現李斯特菌屬在核酸水平上的定性檢測。

1、核酸提取

1）取40μL增菌液于裂解液管中，98℃或沸水浴10min。

2）冷卻至室溫，吸取上清備用或者置于-20℃保存。

2、反應體系配置

從試劑盒中取出List預混液，充分融化，渦旋后短暫離心，然后將陰性對照、樣品的DNA提取液、陽性對照各取5μL分別加入PCR管或PCR板中，蓋好管蓋或板膜，短暫離心，立即進行PCR擴增反應。

3、PCR擴增

PCR管或PCR板置于PCR儀上，推薦反應程序設定如下：反應體系為25μL，在第二步每個循環60℃時檢測熒光信號，檢測通道選擇CY5。

注：使用ABI系列PCR儀器，如果不添加ROX，“passive reference”和 “quencher”均選擇“none”。